如何看懂流式結果圖

流式結果圖有4種類型，分別為:1. 直方圖  2.散點圖  3. 等高線圖  4.密度圖

下面一一為大家介紹

1. 直方圖（Histograms）

a.橫坐標代表熒光信號或散射光信號相對強度，可以是線性或對數坐標。

b.縱坐標一般是相對細胞數。

直方圖適用于分析處理周期（如下圖）

直方圖分析數據注意事項：

① 不能比較不同標記之間的表達量。如一號樣本單標記CD133、二號樣本單標記CD44，那么CD133與CD44表達量不能用直方圖進行比較。

② 直方圖的形狀（直方圖的高度及寬度）取決于儀器的類型、處理軟件和樣本

③檢測目的細胞非常少（即檢測的細胞在一個細胞群體中所占的比例特別少），因此需要統計大量的數據，直方圖將會將該稀有細胞覆蓋，如下圖散點圖中的P2門為CD16陰性群體，但在直方圖中則幾乎看不出來，所以此時散點圖為展示數據方式。

2. 散點圖（Dot plots）

散點圖是雙變量圖的基本圖形，相對于單參數直方圖其分析通量更高，同時也能更好觀察到較小比例細胞群，參見直方圖注意事項2，另外散點圖中設門后，可以賦予門控顏色，便于觀察門控細胞群在其他圖中的分布，比如下圖只賦予淋巴細胞門紅色，則可以觀察到淋巴細胞中在散射光圖中的分布。

橫坐標和縱坐標都是光信號，十字門左下角是雙陰性群，右下角和左上角是單陽群，右上角是雙陽群。散點圖上的每一個點可以代表某一個細胞的信息。

但是散點圖在顯示足夠多events下的細胞分群上缺乏細節，如下圖，流式儀器記錄的events達到50000以上時，CCR7的陽性群與陰性群已經沒有明顯界限，但當用等高線圖或者密度圖時，明顯改善點圖存在的缺點。

3.密度圖（Density plot）

密度圖不僅能夠表示一個標記的表達水平，還能顯示給定區域中事件的相對數量（密度）。有三種密度圖。密度度、斑馬線圖、偽彩圖。選擇自己一種喜歡的應用

4.等高線圖（Contour plots）

等高線圖是另一顯示數據密度的形式。該圖使用等高線顯示數據的相對強度。等高線的每條線包含events的百分比由所用軟件的等高線圖決定。單純的等高線圖不能顯示低密度的群體顆粒或者異常值，比較好的策略為等高線圖與點圖結合起來使用，比如下圖左邊為點圖，中間為等高線圖，左邊為等高線加點圖。

分析，建議用散點圖用直方圖不能說錯，但這需要在沒有自發熒光或自發熒光低、熒光滲漏調整到位的情況下。而在實際檢測中，自發熒光總是難以避免，更不用說現在多色流式中熒光滲漏對通道的干擾。

通過下面這個圖可以明顯看出，在直方圖上，自發熒光造成的拖尾，使得你的陰陽性分界位置難以確定，即使GFP樣本能夠形成雙峰，但實際上雙峰分界位置同時包括了自發熒光假陽性信號、陽性群弱表達信號，這兩部分信號數量一樣的時候，這個位置恰好相互抵消，但如果不一樣的，這個比例就不準確了，如果改用下面的散點圖，用不規則門（如下面的梯形門），就可以準確圈出陽性群，呈現更真實的比例：

綜上，不同類型的流式圖各有優缺點，適用于不同類型的檢測。