細胞污染防治的一些建議

  無論新人還是熟手，細胞污染都是必須要面對的，那對于細胞污染，我覺得zui好的措施就是預防為主，因為細胞一旦污染，想救是非常困難的，即便救活，細胞狀態也會差很多。所以我先來說下我是怎么預防細胞污染的。

      生物安全柜是處理細胞的主要場所，也是細胞發生污染的主要場所，所以安全柜的正確使用是預防細胞污染的di一步。那么安全柜內需要注意的小細節有哪些呢？

       首先，所有進入安全柜的東西在進入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜，再進入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實驗耗材盡量放置在合適的容器內用報紙包好后滅菌，如*頭插入*頭盒，其他不規則的耗材可放入鋁制飯盒內。*頭插入*頭盒時要帶手套，因為滅菌可能無法去除*頭上可能粘附的油脂或其他雜質。

       其次，安全柜內的東西要擺放有序，這個可以根據個人使用習慣而定（如果站友使用的是公用安全柜，則可能需要使用前臨時調整），以我為例，移液器和*頭盒（各種規格備齊）放右邊，實驗中需要使用的試劑放右前方，廢液缸放左前方，并保證和試劑有一定安全距離，右角放置培養皿，左角放置其他耗材（如試管等），盡量保證常用的東西放右手邊（左撇站友相反），次常用的東西放左手邊（左撇站友相反），右邊操作區域為潔凈區，左邊為非潔凈區（如廢液缸和其他用剩材料）。

       再次，由于使用安全柜的過程中手和前臂都是要進入安全柜的，所以有條件的站友應該準備至少一件細胞房連體潔凈服（裝入布袋消毒后烘干，在細胞房中取出，非更換前不得穿出細胞房），沒有條件的站友則至少準備一副套袖，每次用完后放安全柜中紫外消毒。

       在準備工作一切就緒后，細胞的處理過程也是大家需要注意的。細胞處理前應將當次實驗需要的各種試劑、耗材準備齊備，盡量減少細胞處理過程中的來回走動。安全柜使用前zui好紫外照射30min滅菌，然后通風5min保證換氣到位。實驗過程中，所有試劑zui好不用就蓋上瓶蓋，如果需要打開瓶蓋，則除了干凈的*頭，其他任何東西都不要從瓶口的正上方經過，防止試劑污染。細胞培養若使用培養皿，則zui好不要長時間打開皿蓋。另外移液器也是細胞污染的一個隱藏途徑，特別是使用無濾芯*頭的站友，在吸取試劑時，很容易不小心將試劑倒吸入移液器，如果發生這種情況，要及時用酒精棉球擦去倒吸的試劑，特別是培養基，極易成為細菌生長的溫床。一把污染的移液器可以輕松污染站友的所有細胞，甚至整個實驗室的細胞，所以友情推薦有條件的站友在處理細胞時一定要使用帶濾芯的*頭。當然即便是使用帶濾芯的*頭，也要盡量避免試劑倒吸，因為想要*去除倒吸入移液器的試劑非常困難。

       培養箱作為細胞培養的場所，也需要站友留心。由于培養箱內的溫度和濕度很高，是很適宜細菌生長的，所以如果有條件（實驗室有2個或以上培養箱），zui好定期用75%酒精擦拭培養箱，及時定期更換培養箱內水槽。

       那么細胞如果還是不幸污染了，那又該怎么辦呢？我把細胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細胞狀態變差，但依舊能保持生長，顯微鏡下（光鏡）不可見明顯微生物或可見少量微生物，這時候我們在換液時建議多用PBS洗幾次，然后用雙抗原液侵潤細胞1-2min，吸去，再加入正常培養基。早期污染只要發現及時，處理得當，救回來的可能性還是很大的。晚期污染則是細胞形態發生明顯改變，細胞停止生長，顯微鏡下可見明顯微生物。這時候我建議大家及時清理掉相關細胞，以免污染其他細胞，重新復蘇更早批次的細胞。所以大家會發現，新細胞收到后，不應急于開展實驗，而應該先小心培養，凍存1到2個批次的早期細胞，然后再開展實驗，這樣實驗細胞一旦出現問題，可以有庫存細胞保證實驗還能繼續進行。